酵母表面展示技术平台

酵母表面展示（Yeast surface display，YSD）是一种强大的蛋白质工程技术,是目前蛋白工程中重要的高通量筛选平台。酵母细胞具有真核细胞翻译后修饰机制，能够帮助目的蛋白正确折叠，可以用来展示各种真核蛋白，包括抗体、受体、酶和抗原肽等。

阿帕克生物具有经验丰富的专业团队和先进技术平台，结合流式细胞分选提供基于酵母表面展示技术的蛋白质工程服务，用于改善蛋白质性质，包括亲和力、特异性、酶功能和稳定性等，欢迎咨询与合作交流！

技术原理

NBbiolab酵母表面展示平台采用“α-凝集素”展示系统，将纳米抗体基因序列和表达标签HA tag基因序列插入至蛋白质支架-Aga2基因的展示质粒载体中，该载体使用营养标记物在酵母中维持选择性生长，并通过培养基中加入半乳糖诱导酵母进行表面展示，纳米抗体融合蛋白被分泌并锚定在酵母细胞壁上。再结合磁珠及流式分选技术进行多轮筛选，可筛选得到高亲和力、高稳定性的克隆。

图 阿帕克生物基于a-凝集素的 Saccharomyces cerevisiae 酵母表面展示系统示意图

酵母表面展示技术优势

NBbiolab HITSmart纳米抗体发现服务

阿帕克生物将酵母表面展示、细胞流式分选与NGS结合使用，解放常规文库筛选的局限，实验效率翻倍，一次实验可获得超越传统筛选方式的百倍优质克隆！已为多家企业成功筛选到高亲和力抗体（靶点有HSA等）阻断抗体（靶点有PD-L1、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT等），特异性抗体（靶点有CD16a,FcRL5等）和TCR mimic 抗体。

NBbiolab HITSmart纳米抗体服务流程

NBbiolab HITSmart纳米抗体服务优势

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酵母表面展示VS噬菌体展示（点击篇名跳转阅读）

【摘要】酵母表面展示与噬菌体展示相比，具有显著优势。酵母具有类似于高等真核生物的分泌途径，使蛋白质能够正确地折叠和分泌。与噬菌体表面展示不同的是，使用FACS可以基于亲和力和展示水平筛选库，对于在酵母表面展示中的高亲和力的选择不受表达水平的负面影响，这消除了表达偏向可能引起的任何潜在偏差。此外，酵母表面展示可实时区分仅在抗体亲和力上略有不同的克隆。通过两色染色，可以直接在酵母细胞表面确定抗体亲和力，避免了亚克隆、表达和纯化的需要。这种技术使得在一种展示格式中，可以快速筛选和优化目标抗体的亲和力、稳定性和细胞外表达。

酵母展示技术用于提高蛋白质的亲和力（点击篇名跳转阅读）

【摘要】酵母展示技术可以区分亲和力只有2倍差异的蛋白质，具有较高的敏感性，已经成为蛋白质亲和力成熟的重要工具。如图 4 所示，一般通过随机突变创建大小为107 −109 的蛋白质突变文库，经电转化和同源重组，这些突变体与 Aga2p 融合展示在酵母表面；通过与荧光标记配体一起孵育，用FACS分选高亲和力突变体，每一轮分选的细胞可以扩增培养参与再次分选，从而降低文库多样性，最终获得少量的高亲和力酵母细胞克隆；也可以提取所选酵母细胞 DNA，进行新一轮随机突变，构建新的展示文库，参与新一轮分选，直到筛选出所需亲和力的蛋白质。

酵母展示技术用于TCR工程化改造（点击篇名跳转阅读）

【摘要】体内天然的TCRs虽然表现出与抗体相似的遗传和序列多样性，但TCRs的结合亲和力比抗体要低几个数量级。尽管TCR亲和力与T细胞活性之间的相关性存在一些分歧，但选择高亲和力TCR或通过定向进化微调TCR的亲和力都是改善TCR-T抗肿瘤反应的技术手段。通过酵母表面展示技术对TCR的重链和轻链可变区的互补决定区进行随机突变得到酵母展示文库，经过多轮筛选，定向进化后的TCR可实现皮摩尔范围内的亲和力。与噬菌体展示方法相比，使用酵母表面展示TCR定向进化的一个主要优点是它能够直接评估在酵母细胞上表达的TCR或突变体的结合亲和力，而不需要经过大量的蛋白质表达和纯化步骤。

酵母表面展示技术用于酶的定向进化（点击篇名跳转阅读）

【摘要】酶蛋白有广泛的应用价值，参与各种化学反应，包括分解、合成和能量转化等。

通过定向进化，人们可以调整酶蛋白的结构和活性，使其更具高效性和特异性。使用酵母展示技术已成功实现了酶的人工定向进化。多种酶已成功展示在酵母细胞表面。米黑根毛霉脂肪酶(RML)是一种生物催化剂，通过定点突变并展示在酵母细胞表面，得到的突变体显示出比原始酶活性更高的酯化活性，可应用于食品工业、精细化工和生物柴油生产。 抗坏血酸过氧化物酶(APEX)是一种工程过氧化物酶，通过酵母展示系统进行定向进化，创造了进化的分裂APEX2系统，具有较高的过氧化物酶活性，可应用于新领域的生物学研究。使用酵母展示系统展示的β-葡萄糖苷酶，可以增加饮料的香气和风味。