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噬菌体展示技术

Time:2023-05-10 author:本站 read:

噬菌体展示技术是一种基于噬菌体表面展示外源多肽、抗体或蛋白质的技术。该技术最早由George P. Smith等人于1985年首次报道,并在90年代初由John McCafferty和Gregory Winter应用在抗体工程领域。之后经过不断改进和完善,已经成为现代生物医学研究领域中的重要工具之一。2018年,噬菌体展示研究的两位先驱,美国科学家乔治·史密斯(George P. Smith)和英国科学家格雷格·文特(Gregory P.Winter)荣获诺贝尔化学奖。

 

在噬菌体展示技术中,外源蛋白或多肽序列被克隆到噬菌体表面蛋白的特定区域中,从而将其展示在噬菌体表面。随后,噬菌体库中的噬菌体可以被用于筛选出与目标分子结合的抗体或蛋白质。这种技术可以高通量地筛选出具有特异性的抗体或蛋白质,因此被广泛应用于新药研发、抗体筛选、疫苗开发等领域。

 

噬菌体展示的原理

噬菌体展示技术是将外源的多肽,抗体等片段,插入到噬菌体的结构基因,常见的是与PIII或PVIII融合表达,被展示在噬菌体表面的分子仍然保持生物活性。要从噬菌体文库中挑选出想要的分子,就要经过 “淘筛”。该过程简单地说就是被展示在噬菌体表面的肽库或者蛋白库能够特异地与目标抗原识别并结合,经过足够时间的孵育之后,可使用洗涤液洗去与抗原结合较弱或者未结合的游离噬菌体。随后将特异性结合的目标噬菌体洗脱下来,感染大肠杆菌并进行扩增以得到下一轮的子噬菌体库。随后经过2轮~3轮的“吸附-洗脱-扩增”富集过程后,能够与抗原特异性结合的噬菌体的比例得到了逐步提高。最终获得能够识别靶分子的多肽或者蛋白,可被用于后续的实验。

 

噬菌体展示技术有以下优势

高通量:噬菌体展示技术可以同时展示成千上万种不同的抗体或蛋白质,可以大大加快筛选的速度,提高效率。

稳定性:噬菌体抗体库可以长期保存并使用,从而可以实现长期的研究和开发工作。

灵活性:噬菌体展示技术可以用于展示各种类型的分子,包括抗体、蛋白质、多肽等,因此具有广泛的应用前景。

 

噬菌体展示技术存在的局限

原核表达:

噬菌体是一种病毒,需要感染大肠杆菌才能进行复制与扩增,是原核表达体系。但抗体是来源于真核,由于密码子的偏好性,不能够让有些抗体能够得到有效的展示或有毒,导致克隆丢失。

 

偏向性:

噬菌体的偏向性非常严重,主要是由3个方面引起的:a.噬菌体是原核体系,而抗体来源于真核,由于密码子的偏好性和有些分子对E.coli有毒,导致克隆生长过程中生长速率不一致,甚至导致克隆丢失;b.没有插入片段的克隆,生长速度远远超过插入片段的克隆,导致文库质量降低;c.ORF读码框不正确,也会导致这类克隆生长过快。

 

抗体库构建:

构建高质量的噬菌体抗体库需要大量的时间和精力,因此需要专业的技术和设备支持。

 

不适用于大分子:

噬菌体展示技术对分子大小存在一定的限制,对于大分子的展示效果较差。

 

噬菌体展示技术具有明显的优点和局限性,需要根据具体应用情况进行选择和优化。


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阿帕克生物噬菌体展示技术优势  

1. 基于5' RACE,优化抗体扩增上游引物,提高抗体序列覆盖度,降低偏向扩增。

2.  "零背景”技术保证文库插入率达到100%。

3. 同源重组与超级感受态联合使用让文库库容量达到109


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参考资料:

1. Hoogenboom HR (2002) Overview of antibody phage-display technology and its applications. Methods Mol Biol 178:1–37.

2. Griffiths AD, Malmqvist M, Marks JD et al (1993) Human anti-self antibodies with high specifi city from phage display libraries. EMBO J 12:725–734.

3. Vincke C, Gutiérrez C, Wernery U, Devoogdt N, Hassanzadeh-Ghassabeh G, Muyldermans S. Generation of single domain antibody fragments derived from camelids and generation of manifold constructs. Methods in Molecular Biology. 2012;907:145-176. doi:10.1007/978-1-61779-974-7_7





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